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DNA Cloning Service
DE

CRISPR/Cas

pU6pp-SmCms1 D430

CRISPR/Cas-Vektor mit SmCms1.

1234567Cms1''Ubi-intColE1IntronU6 PpNOS-TMfeI (331)NcoI, NheIBamHI (1610)SapI, AatIIBsrGI (2748)SmaI (4849)EcoRI (5109)HindIII, SalIBsaI (6349)D430pU6pp-SmCms17.050 bp

GenBank (.gbk)SnapGene (.dna)FASTA.seq

Lässt sich öffnen in SnapGene Viewer (kostenlos), Benchling, ApE und Geneious.

Restriktionsschnittstellen

Single Cutter · SchnittstelleSchneidet beiLage
MfeI (MunI)C^AATTG331in Ubi-int
NcoIC^CATGG1.144in Intron
NheI (BmtI)G^CTAGC1.217in Intron
BamHIG^GATCC1.610zwischen Ubi-int und NLS
SapI (BspQI, LguI)GCTCTTC(1/4)1.895in Cms1''
AatII (ZraI)GACGT^C1.959in Cms1''
BsrGI (Bsp1407I)T^GTACA2.748in Cms1''
SmaI (XmaI, TspMI)CCC^GGG4.849zwischen Cms1'' und NOS-T
EcoRIG^AATTC5.109zwischen NOS-T und U6 Pp
HindIIIA^AGCTT5.480in Target
SalIG^TCGAC5.497zwischen Target und ColE1
BsaI (Eco31I)GGTCTC(1/5)6.349in Amp

Schneiden zweimal: XbaI (130, 1.125), SacI (3.063, 3.771), ClaI (1.330, 4.026), SfiI (87, 5.511), NsiI (1.375, 4.972), BsmBI (5.464, 5.496).

Keine Schnittstelle: SphI, KpnI, NotI, SpeI, MluI, AscI, PacI, SbfI, FseI, PmeI, SwaI, AvrII, BsiWI, AgeI, HpaI, EagI, SacII, BstEII, BbsI, AarI.

Aus der GenBank-Sequenz berechnet für 50 gängige Enzyme; Positionen bezeichnen den Schnitt im oberen Strang, ohne Dam/Dcm-Methylierung. Vektoren vergleichen in der Restriktionsschnittstellen-Suche.

Promotor 1
U6
Gen 2
SmCms1
Größe
7.050 bp, zirkulär
Datum des Eintrags
11-APR-2019

Konstrukt

  • Ubi-int–Cms1 · NOS-T · Kassette mit Insert, 98–5.105
  • U6 Pp (kein Scaffold annotiert) · gRNA-Kassette, 5.115–5.433
  • BsmBI Golden Gate · Überhänge TAGA, GTCG · Pos. 5.464, 5.496

Ligation of CmsTarget_EcoSal* into D429pU6pp-Cm1ohneSal*

Ausgelesen aus der GenBank-Datei; alle Vektoren im Vergleich in der Tabelle Mehrere Expressionskassetten.

Annotierte Elemente

ElementTypStartEndeLängeStrang
Ubi-intPromotor misc_feature981.6061.509+
IntronSchnittstelle misc_feature1.0851.604520+
NLSSchnittstelle misc_feature1.6251.65127+
Cms1''Kodierende Sequenz CDS1.6254.8463.222+
NOS-TTerminator misc_feature4.8525.105254+
U6 PpPromotor misc_feature5.1155.433319+
LeaderSchnittstelle CDS5.4345.44916+
DRSchnittstelle misc_feature5.4345.46936+
HairpinSchnittstelle CDS5.4505.46920+
TargetSchnittstelle CDS5.4705.49526+
ColE1Origin / Backbone misc_feature5.5486.212665−
AmpSchnittstelle misc_feature6.213250−

PromotorKodierende SequenzTerminatorSelektionsmarkerOrigin / BackboneT-DNA-Grenze (Border)Schnittstelle

Die Elementtypen werden aus den Bezeichnungen in der GenBank-Datei abgeleitet; maßgeblich ist die Datei selbst.

Zitierweise

Bitte zitieren Sie den Vektor im Methodenteil wie folgt.

pU6pp-SmCms1 (D430; DNA Cloning Service e.K., Hamburg, Germany; https://dna-cloning.com/vectors/crispr/pU6pp-SmCms1; RRID:SCR_029231)

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