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DNA Cloning Service
ES

CRISPR/Cas

p6ioR-35sCasWToi B792

Vector CRISPR/Cas con 35s–hptII y 35s–Cas9.

24681012'Cas9WT'pVS1Sm/SpColE1hptII'RNA''hptIIU6At35S-Pro35S'E9NOS-TintgRNANLSLBRBXbaI (303)XhoI (727)MluI (1960)PstI, SbfISpeI, BamHI, SacISmaI, NsiI, EcoRIBstBI, HindIII, SalI, ApaIKpnI, PmeIFseI (11045)BsiWI, NheI, ClaIB792p6ioR-35sCas13.907 bp

GenBank (.gbk)SnapGene (.dna)FASTA.seq

Se abre en SnapGene Viewer (gratuito), Benchling, ApE y Geneious.

Sitios de restricción

Corte único · sitioCorta enUbicación
XbaIT^CTAGA303entre LB y 35S
XhoI (PaeR7I)C^TCGAG727entre 35S y Kozak
MluIA^CGCGT1960entre hptII y E9
PstICTGCA^G2270entre E9 y 35S-Pro
SbfI (SdaI)CCTGCA^GG2270entre E9 y 35S-Pro
SpeIA^CTAGT2736entre 35S-Pro y Cas9WT
BamHIG^GATCC2743entre 35S-Pro y Cas9WT
SacI (Ecl136II)GAGCT^C2799en Cas9WT
SmaI (XmaI, TspMI)CCC^GGG6957entre Cas9WT y NOS-T
NsiI (Mph1103I)ATGCA^T7080en NOS-T
EcoRIG^AATTC7217entre NOS-T y RNA'
BstBI (Bsp119I)TT^CGAA7675en targetRNA
HindIIIA^AGCTT7678en targetRNA
SalIG^TCGAC7778entre RNA' y RB
ApaI (PspOMI)GGGCC^C7809entre RNA' y RB
KpnI (Acc65I)GGTAC^C7815entre RNA' y RB
PmeI (MssI)GTTT^AAAC7847entre RNA' y RB
FseIGGCCGG^CC11.045en pVS1
BsiWI (Pfl23II)C^GTACG11.273en pVS1
NheI (BmtI)G^CTAGC11.389en pVS1
ClaI (BspDI)AT^CGAT11.469en pVS1

Corte doble: NcoI (2296, 4222), NdeI (9353, 9933), BglII (3050, 7798), SfiI (2301, 7792), MfeI (14, 1421), AgeI (11.883, 12.191), AatII (3341, 8238), BstEII (1035, 12.754), BsmBI (7662, 7694).

Sin sitio: AscI, PacI, SwaI, AvrII, HpaI, BsrGI, AarI.

Calculado a partir de la secuencia GenBank para 50 enzimas comunes; las posiciones son el corte en la hebra superior, sin metilación Dam/Dcm. Compare vectores en el buscador de sitios de restricción.

Promotor 1
35s
Gen 1
hptII
Promotor 2
35s
Gen 2
Cas9
Características
U6At
Otros marcadores
hptII, Sm/Sp
Tamaño
13.907 bp, circular
Fecha del registro
31-MAR-2016

Construcción

  • 35S–hptII · E9 · casete de selección, 309–2260
  • 35S-Pro–Cas9WT · NOS-T · casete con inserto, 2315–7213
  • MCS · 4 sitios únicos · en 7778, 7847
  • SfiI ×2 · flanquea el casete 35S-Pro–Cas9WT · en 2301, 7792
  • BsmBI Golden Gate · overhangs TGAT, GTTT · en 7662, 7694
  • Bordes del T-DNA · LB, RB

Ligation of B413p6o-LH* into B764p9ioR-35sCasWToi*

Extraído del archivo GenBank; compare todos los vectores en la tabla de múltiples casetes de expresión.

400 €

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Elementos anotados

ElementoTipoInicioFinLongitudHebra
LBBorde del T-DNA misc_feature12424+
35SPromotor misc_feature309724416+
KozakSitio misc_feature7407445+
hptIIMarcador de selección CDS7451314570+
intSitio misc_feature13151503189+
'hptIIMarcador de selección CDS15041959456+
'E9Terminador misc_feature19702260291+
35S-ProPromotor misc_feature23152732418+
TATA-boxSitio CDS270327097+
'Cas9WTSecuencia codificante CDS275869544197+
NLSSitio misc_feature2764278421+
NLSSitio misc_feature6904695148+
NOS-TTerminador misc_feature69607213254+
'RNA'Otro misc_feature72187778561+
U6AtSecuencia codificante CDS72237667445+
targetRNASitio CDS7668769427+
hairpinSitio CDS7695772430+
gRNASitio misc_feature7695777783+
RBBorde del T-DNA misc_feature7863788624+
ColE1Origen / backbone misc_feature84219118698+
'pVS1Origen / backbone misc_feature940612.1932788+
Sm/SpMarcador de selección CDS12.37713.3871011+

PromotorSecuencia codificanteTerminadorMarcador de selecciónOrigen / backboneBorde del T-DNASitio

Los tipos de elemento se deducen de las anotaciones del archivo GenBank; la referencia es el propio archivo.

Cómo citar

Cite el vector así en la sección de Materiales y métodos.

p6ioR-35sCasWToi (B792; DNA Cloning Service e.K., Hamburg, Germany; https://dna-cloning.com/vectors/crispr/p6ioR-35sCasWToi; RRID:SCR_029231)

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