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DNA Cloning Service
PT

CRISPR/Cas

pU6pp-MiCms1 D522

Vetor CRISPR/Cas com MiCms1.

1234567ORF-1Ubi-intColE1IntronU6 PpNOS-TNLSNcoI, ApaI, NheIBamHI (1610)AarI (4338)AgeI (4676)SmaI (4876)EcoRI (5136)PvuII (5324)HindIII, SalIBsaI (6362)D522pU6pp-MiCms17.063 bp

Sítios de restrição

Corte único · sítioCorta emLocalização
NcoIC^CATGG1.144em Intron
ApaI (PspOMI)GGGCC^C1.157em Intron
NheI (BmtI)G^CTAGC1.217em Intron
BamHIG^GATCC1.610entre Ubi-int e ORF-1
AarICACCTGC(4/8)4.338em ORF-1
AgeI (BshTI)A^CCGGT4.676em ORF-1
SmaI (XmaI, TspMI)CCC^GGG4.876entre ORF-1 e NOS-T
EcoRIG^AATTC5.136entre NOS-T e U6 Pp
PvuIICAG^CTG5.324em U6 Pp
HindIIIA^AGCTT5.493entre DR e ColE1
SalIG^TCGAC5.510entre DR e ColE1
BsaI (Eco31I)GGTCTC(1/5)6.362em Amp

Corte duplo: XbaI (130, 1.125), SfiI (87, 5.524), MfeI (331, 4.642), NsiI (1.375, 4.999), BsrGI (1.806, 2.766), BsmBI (5.477, 5.509), SapI (3.521, 3.626).

Sem sítio: SphI, KpnI, NotI, SpeI, MluI, AscI, PacI, SbfI, FseI, PmeI, SwaI, AvrII, BsiWI, HpaI, EagI, SacII, AatII, BstEII, BbsI.

Calculado a partir da sequência GenBank para 50 enzimas comuns; as posições são o corte na fita superior, sem metilação Dam/Dcm. Compare vetores no localizador de sítios de restrição.

Promotor 1
U6
Gene 2
MiCms1
Tamanho
7.063 bp, circular
Data do registro
12-JUN-2019

Construção

  • Ubi-int–ORF-1 · NOS-T · cassete com inserto, 98–5.132
  • U6 Pp (sem scaffold anotado) · cassete de gRNA, 5.142–5.460

Ligation of MiCms1_BamXma* into D054pU6pp-LbCpf1*

Extraído do arquivo GenBank; compare todos os vetores na tabela de múltiplos cassetes de expressão.

Elementos anotados

ElementoTipoInícioFimComprimentoFita
Ubi-intPromotor misc_feature981.6061.509+
IntronSítio misc_feature1.0851.604520+
ORF-1Sequência codificadora CDS1.6254.8733.249+
NLSSítio misc_feature1.6311.65121+
NLSSítio misc_feature4.8234.86947+
NOS-TTerminador misc_feature4.8795.132254+
U6 PpPromotor misc_feature5.1425.460319+
DRSítio misc_feature5.4625.48221+
ColE1Origem / backbone misc_feature5.5616.225665−
AmpSítio misc_feature6.226250−

PromotorSequência codificadoraTerminadorMarcador de seleçãoOrigem / backboneBorda do T-DNASítio

Os tipos de elemento são deduzidos das anotações do arquivo GenBank; o próprio arquivo é a referência.

Como citar

Cite o vetor assim na seção de Métodos (Material e Métodos).

pU6pp-MiCms1 (D522; DNA Cloning Service e.K., Hamburg, Germany; https://dna-cloning.com/vectors/crispr/pU6pp-MiCms1)

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