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DNA Cloning Service
ES

CRISPR/Cas

pU6pp-Pb2Cpf1 D521

Vector CRISPR/Cas con Pb2Cpf1.

1234567ORF-1Ubi-intColE1IntronU6 PpNOS-TNLSMfeI (331)XhoI (797)NcoI, ApaI, NheI, ClaIBamHI (1610)AarI, BstEIIEagI (2847)AatII (3804)SacII (4252)SmaI (5476)EcoRI (5736)HindIII, SalIBsaI (6962)XmnI (7500)D521pU6pp-Pb2Cpf17663 bp

Sitios de restricción

Corte único · sitioCorta enUbicación
MfeI (MunI)C^AATTG331en Ubi-int
XhoI (PaeR7I)C^TCGAG797en Ubi-int
NcoIC^CATGG1144en Intron
ApaI (PspOMI)GGGCC^C1157en Intron
NheI (BmtI)G^CTAGC1217en Intron
ClaI (BspDI)AT^CGAT1330en Intron
BamHIG^GATCC1610entre Ubi-int y ORF-1
AarICACCTGC(4/8)2636en ORF-1
BstEII (Eco91I)G^GTNACC2672en ORF-1
EagI (Eco52I)C^GGCCG2847en ORF-1
AatII (ZraI)GACGT^C3804en ORF-1
SacII (Cfr42I)CCGC^GG4252en ORF-1
SmaI (XmaI, TspMI)CCC^GGG5476entre ORF-1 y NOS-T
EcoRIG^AATTC5736entre NOS-T y U6 Pp
HindIIIA^AGCTT6093entre DR y ColE1
SalIG^TCGAC6110entre DR y ColE1
BsaI (Eco31I)GGTCTC(1/5)6962en Amp
XmnI (PdmI)GAANN^NNTTC7500en Amp

Corte doble: XbaI (130, 1125), EcoRV (45, 5861), SfiI (87, 6124), PvuI (698, 7271), PvuII (2778, 5924), BsmBI (6077, 6109).

Sin sitio: SphI, KpnI, SacI, NotI, SpeI, MluI, AscI, PacI, SbfI, FseI, PmeI, SwaI, AvrII, BsiWI, AgeI, HpaI, BsrGI, BbsI, SapI.

Calculado a partir de la secuencia GenBank para 50 enzimas comunes; las posiciones son el corte en la hebra superior, sin metilación Dam/Dcm. Compare vectores en el buscador de sitios de restricción.

Promotor 1
U6
Gen 2
Pb2Cpf1
Tamaño
7663 bp, circular
Fecha del registro
07-JUN-2019

Construcción

  • Ubi-int–ORF-1 · NOS-T · casete con inserto, 98–5732
  • U6 Pp (sin scaffold anotado) · casete de gRNA, 5742–6060

Ligation of Pb2Cpf1-Bam-Xma* into D054pU6pp-LbCpf1*

Extraído del archivo GenBank; compare todos los vectores en la tabla de múltiples casetes de expresión.

Elementos anotados

ElementoTipoInicioFinLongitudHebra
Ubi-intPromotor misc_feature9816061509+
IntronSitio misc_feature10851604520+
ORF-1Secuencia codificante CDS162554733849+
NLSSitio misc_feature1631165121+
NLSSitio misc_feature5423547048+
NOS-TTerminador misc_feature54795732254+
U6 PpPromotor misc_feature57426060319+
DRSitio misc_feature6062608221+
ColE1Origen / backbone misc_feature61616825665−
AmpSitio misc_feature6826250−

PromotorSecuencia codificanteTerminadorMarcador de selecciónOrigen / backboneBorde del T-DNASitio

Los tipos de elemento se deducen de las anotaciones del archivo GenBank; la referencia es el propio archivo.

Cómo citar

Cite el vector así en la sección de Materiales y métodos.

pU6pp-Pb2Cpf1 (D521; DNA Cloning Service e.K., Hamburg, Germany; https://dna-cloning.com/vectors/crispr/pU6pp-Pb2Cpf1)

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